• • • • 1. 1. اندازه‌گیری هورمون LH در سرم

         

         

     

     

قبل از شروع آزمایش، اطمینان حاصل می‌کنیم که کلیه‌ی استانداردها، معرف‌ها و نمونه‌ها، به دمای اتاق (۲۸-۲۲ درجه‌ی سانتی‌گراد) رسیده‌اند. کلیه استانداردها را با سر و ته کردن، به‌آرامی مخلوط می‌کنیم.

• • تعداد چاهک‌های مورد نیاز برای انجام آزمایش را برداشته و بقیه‌ی چاهک‌ها را با چسب مخصوص پلیت می‌پوشانیم و همراه رطوبت‌گیر در کیسه‌ی آلومینیومی قرار داده، در آن را بسته و در دمای ۸-۲ درجه‌ی سانتی‌گراد نگه می‌داریم.

• ۵۰ میکرولیتر از استاندارد و نمونه در چاهک‌های مورد نظر می‌ریزیم. بهتر است که از هر نمونه یا استاندارد به صورت دوتایی (Duplicate) در چاهک‌ها ریخته شود.

توجه: حتماً چاهک اول به عنوان بلانک در نظر گرفته شود. در این چاهک، نمونه و یا استاندارد نمی‌ریزیم. بقیه‌ی مراحل با سایر چاهک‌ها یکسان می‌باشد.

• ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کونژوگه (Enzyme Conjugate) به هر چاهک اضافه کنید. برای مدت ۳۰ ثانیه پلیت را روی سطح میز به‌آرامی تکان می‌دهیم.

• چاهک‌ها را با چسب مخصوص پلیت می‌پوشانیم و به مدت ۶۰ دقیقه (± ۱۰ دقیقه) در دمای اتاق انکوبه می‌کنیم.

• محتویات چاهک‌ها را با وارونه کردن پلیت یا آسپیره کردن خارج می‌کنیم. سپس چاهک‌ها را ۵ مرتبه و هر مرتبه با ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو می‌شوییم. اگر شستشو به صورت دستی انجام شود در انتهای شستشو به‌آرامی پلیت را بر روی دستمال رطوبت‌گیر می‌زنیم.

• ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آماده بکار رنگزا درون تمام چاهک‌ها می‌ریزیم.

• مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق و تاریکی پلیت را انکوبه می‌کنیم.

• ۵۰ میکرولیتر محلول متوقف‌کننده‌ی واکنش به کلیه‌ی چاهک‌ها اضافه می‌کنیم. به مدت ۲۰ ثانیه به‌آرامی پلیت را تکان داده تا تمام رنگ آبی آن به زرد تبدیل شود.

• مقدار جذب نور را برای هر چاهک در طول موج ۴۵۰ نانومتر (از طول موج و فرکانس ۶۳۰-۶۲۰ نانومتر استفاده می‌کنیم) با بهره گرفتن از روش Point to Point حداکثر تا ۱۵ دقیقه بعد از متوقف کردن واکنش می‌خوانیم.

جدول ۳-۲- مقادیر مورد انتظار برای سیستم تست LH به روش ELISA

Normal Range

۰٫۸-۱۰٫۸ mlu/ml

Follicular Phase Female

۱۷-۶۵ mlu/ml

Midcycle Peak Female

۰٫۸-۱۱٫۵ mlu/ml

Luteal Phase Female

۸٫۱-۴۲ mlu/ml

Postmenopasual Female

۰٫۸-۷٫۸ mlu/ml

Male